ПЦР: что это такое? Диагностика инфекционных заболеваний методом полимеразной цепной реакции

Что такое ПЦР метод

Анализ крови на ПЦР (PCR) обнаруживает активных инфекционных агентов и неактивных патогенов, погибших под воздействием медицинских препаратов, на любом этапе развития болезни. Такая способность обусловлена выявлением не просто возбудителя инфекции, а его генома:

  • ДНК (дезоксирибонуклеиновой кислоты) бактерий, паразитов, грибков;
  • РНК (рибонуклеиновой кислоты) вирусов.

Пробирку с образцом крови, взятой у пациента, размещают в амплификаторе – реакторе, обеспечивающем последовательное нагревание и охлаждение образца. К биоматериалу добавляют реакционную смесь. В амплификаторе производится более 30 циклов смены температурного режима, каждый из которых включает 3 этапа (денатурацию, отжиг праймеров, элонгацию).

В ходе многократной реакции амплификации:

  • разрываются водородные цепи макромолекул (ДНК и РНК);
  • образуются комплементарные комплексы матрицы с короткими фрагментами РНК и ДНК (праймеры);
  • термостойка ДНК-полимераза достраивает матричную цепь, и формирует множественные генетические копии возбудителя.

При достаточном количестве копий амплификатор дает качественно-количественную оценку обнаруженному возбудителю. Таким образом, молекулярная диагностика решает три задачи одновременно:

  • обнаруживает инфекционного агента;
  • дифференцирует его принадлежность (вирус, бактерия и т. д) и разновидность;
  • определяет дальнейшую тактику лечения и выбор медикаментов (в соответствии с установленным заболеванием).

ПЦР крови применяют для определения вирусов и бактерий либо тяжелых паразитарных внекишечных инвазий. Генная информация является уникальной, поэтому точность исследования ПЦР практически 100%. Рolymerase Сhain Reaction определяет инфекцию даже при отсутствии активности возбудителя и выраженных симптомов болезни.

Анализ полимеразной цепной реакции крови используется для выявления ЗППП (заболеваний, передающихся половым путем) и урогенитальных инфекций, инфекционных болезней легких, печени, пищеварительной системы, так называемых, детских болезней.

Краткий перечень возбудителей и заболеваний, определяемых по крови, мазку и моче

Вирусы
герпесовирус 1 тип обычный герпес
2 тип генитальный герпес
3 тип краснуха
4 тип (цитомегаловирус) цитомегалия
5 тип (Эпштейн-Барр) инфекционный мононуклеоз
папилломы человека (21 штамм) папилломатоз
HAV, HBV, HCV гепатит А, В, С
иммунодефицита ВИЧ, СПИД
Бактерии
бледная трепонема сифилис
гарднереллы гарднереллез
гонококки гонорея
уреаплазма уреаплазмоз
сальмонелла сальмонеллез
палочка Коха туберкулез
листерия листериоз
стрептококки и стафилококки сепсис, пневмония, менингит
Паразиты, прокариоты, простейшие
описторхи (печеночные сосальщики) описторхоз
плазмодий малярия
токсоплазма токсоплазмоз
лямблии лямблиоз
хламидии хламидиоз
трихомонада трихомониаз
микоплазма микоплазмоз
эхинококки эхинококкоз
шистосомы шистосомоз
цестоды альвеококкоз

Комплексный анализ на ЗППП носит название «профиль ПЦР-12», по количеству определяемых возбудителей. В профиль входят половые инфекции:

  • хламидиоз;
  • гонорея;
  • трихомониаз;
  • сифилис;
  • ВИЧ;
  • обычный и генитальный герпес;
  • цитомегалия и инфекционный мононуклеоз;
  • папилломатоз;
  • гепатиты В, С.

А также микоплазмоз и уреаплазмоз – не относящиеся к венерическим болезням, но передающиеся при интимной близости. Отдельный анализ крови ПЦР на кандидоз (молочницу) практикуется редко, поскольку заболевание легко выявляется по мазку из влагалища (у мужчин из уретры).

Прямыми показаниями являются симптоматические проявления, характерные для половых инфекций:

  • длительная фебрильная (38-39 ℃) температура тела;
  • увеличение лимфатических узлов;
  • кожная сыпь;
  • зудящие высыпания в области наружных половых органов;
  • поллакиурия (учащенное мочеиспускание), сопровождающаяся жжением в уретре;
  • боли в нижней части живота, иррадиирующие в поясницу;
  • диспареуния (болезненные ощущения во время интимной близости и после секса);
  • лейкоррея у женщин (неспецифические влагалищные выделения с неприятным запахом) и выделение слизи из уретры у мужчин.

ПЦР-12 рекомендовано пройти при планировании беременности.

Симптомы и осложнения половых инфекций

Основные симптомы и осложнения половых инфекционных заболеваний

Подготовительные мероприятия обеспечивают максимальную объективность результатов исследования. Правила подготовки к ПЦР анализу крови включают:

  • отказ от приема медикаментов за 5-7 дней до сдачи крови;
  • ограничение жирной пищи и исключение из рациона спиртных напитков за 2 дня;
  • сокращение физической активности накануне забора крови;
  • соблюдение режима голодания 8-12 часов (сдавать кровь необходимо натощак).

За час до процедуры рекомендуется отказаться от никотина (не курить). Забор крови производится из вены, в утренние часы. В современных лабораториях, имеющих условия для проведения ПЦР-диагностики, биоматериал берут при помощи стерильных вакутейнеров. Кровь пациента хранится в течение двух недель, что делает возможным проведение дополнительных тестов.

ПЦР крови

Пример бланка с результатами анализа

ПЦР (полимеразная цепная реакция) — диагностический метод, который позволяет обнаружить в человеческом организме ДНК возбудителей заболеваний, передающихся половым путем (ЗППП). Эта методика также применяется для установления отцовства, выявления наследственных патологий. Ее используют для экспериментов при клонировании и для определения новых генов.

Анализ ПЦР основывается на взятие различных жидкостей из организма в качестве биологического материала. Он позволяет увеличить количество ДНК на одном участке в 2 раза при помощи специальных ферментов. Благодаря этому удается получить больше информации для подтверждения присутствия патогенного микроорганизма в биоматериале. Это позволяет обнаружить даже скрытое заболевание.

У пациентов часто диагностируют ИППП методом ПЦР. Зачастую инфекции, передаваемые половым путем, протекают без выраженной симптоматики. Их возбудителей сложно выявить при помощи других исследований, т.к. они обладают низкой чувствительностью к патогенам. А ПЦР способна определить ДНК микробов в единичном количестве. Это невозможно сделать, например, при микроскопии и бактериологическом посеве.

Диагностика ИППП ПЦР позволяет обнаружить:

  • Хламидиоз и уреаплазмы. Первое заболевание провоцируют хламидии. Они ведут жизнедеятельность в уретре, кишечнике, шейке матки. Без должного лечения приводят к бесплодию. Второй возбудитель вызывает уреаплазмоз. Чаще всего эта болезнь протекает бессимптомно и становится причиной выкидышей.
  • ВИЧ, сифилис и нейросифилис. Последнее заболевание по симптоматике схоже с менингитом.
  • Герпес (простой ВПГ 1 и 2 тип).
  • Токсоплазмоз и краснуху.
  • Инфекционный мононуклеоз (ДНК вируса Эпштейн-Барр-ВЭБ).
  • Микоплазмоз. Мужчины чаще всего являются только носителями инфекции.
  • Трихомониаз. У представителей мужского пола чаще всего протекает бессимптомно или проявляется только жжение при походах в туалет «по-маленькому». У женщин зачастую бывает обнаружено сопутствующее заболевание — трихомонадный кольпит.
  • Кандидоз (молочница).
  • ВПЧ штаммы 16 и 18 (вирус папилломы человека). Есть в организме практически у каждого человека. Большинство штаммов не представляют угрозы, но есть и такие, которые могут привести к онкологии.
  • Цитомегаловирус. Обычно не провоцирует выраженную клиническую картину. Протекает в форме обычного ОРВИ.
  • Гонорея. Провоцирует желтовато-белые выделения с неприятным запахом.
  • Гарднереллез (бактериальный вагиноз). Клиническая картина схожа с молочницей.
  • Туберкулез, листериоз, хеликобактерную инфекцию.
  • Боррелиоз, клещевой энцефалит.

Как стало понятно, ПЦР анализ способен обнаружить возбудителей не только венерических заболеваний. Поэтому для постановки точного диагноза эту методику используют специалисты разных областей: урологи, гематологи, фтизиатры, гинекологи, гастроэнтерологи, онкологи, инфекционисты, венерологи.

Как часто сдавать ПЦР анализ на ЗППП, если ничего не беспокоит

ПЦР на ИППП назначается при возникновении симптоматики венерических заболеваний:

  • зуд и жжение в гениталиях;
  • проблемы с мочевыведением;
  • подозрительные выделения;
  • покраснение влагалища у женщин или полового члена у мужчин;
  • сыпь на гениталиях;
  • разрастание эпителия в шейке матки;
  • эрозии на половых слизистых;
  • воспаления в мочеполовой системе;
  • изменение цвета спермы при подозрении на ИППП у мужчин;
  • увеличение лимфоузлов в паху;
  • сбои в менструальном цикле;
  • выкидыши, патологии беременности, проблемы с зачатием;
  • киста яичников;
  • спайки в органах малого таза;
  • боли внизу живота;
  • простатит у представителей мужского пола.

ВАЖНО!!!

ПЦР: что это такое? Диагностика инфекционных заболеваний методом полимеразной цепной реакции

Вне зависимости от того проявлялись ли перечисленные симптомы, обследование методом ПЦР на ИППП (инфекция, передающаяся половым путем) должны периодически проходить люди, которые ведут беспорядочную половую жизнь, а также женщины при планировании беременности и во время вынашивания плода. Как правило, врач выдает направление на ПЦР, когда уже сданы анализы ОАК и ОАМ, соскоб из уретры и цервикального канала для ИФА, микроскопии или бактериологии., но возбудителей определить не удалось.

Перед диагностикой ИППП к ПЦР нужно подготовиться:

  • Обследование крови должно совершаться натощак. Запрещены и напитки, кроме небольшого количества питьевой воды.
  • За сутки нельзя пить алкоголь, курить, нужно снизить физические нагрузки и избегать стрессовых ситуаций.
  • За 2-3 дня до диагностики ИППП методом ПЦР отказаться от жареных и жирных блюд.
  • За 1-2 суток при сдаче мочи отказаться от интимной близости. Биологический материал собирать сразу после пробуждения.
  • При сдаче семенной жидкости за 4 дня не переохлаждать и не перегревать организм. За 2 суток не заниматься сексом.
  • Женщинам рекомендуется сдавать мазок ПЦР в последний день менструального цикла, когда еще есть незначительные выделения. Не вступать в половой контакт за 2 суток, не проводить гигиену гениталий за 3 часа.
  • При диагностировании сыпи берется соскоб. Перед ним за несколько дней нельзя использовать препараты местного назначения.
  • Не принимать антибиотики за 2-4 недели до сдачи мочи и другого биологического материала. Если отменить лекарства невозможно, сообщить об этом медицинскому работнику.
  • Накануне вечером перед сдачей анализа на ЗППП ПЦР гигиену половых органов осуществлять только водой, без использования гигиенических средств.

Выполнение этих правил необходимо для достоверного диагноза. Если точного результата нет, через сколько сдавать анализ повторно, решает врач.

При возникновении симптоматики заболеваний, которые диагностирует ПЦР, нужно сразу же сдать данный анализ. Также диагностика показана женщинам во время беременности, людям, которые имели за последние полгода двух и более половых партнеров. Анализ назначается и через месяц после окончания лечения ИППП, чтобы убедиться, что все патогены погибли.

  • Скрининговое обследование с целью выявления ИППП
  • Обследование при наличии жалоб пациента и клинических проявлений инфекционно-воспалительного процесса
  • Обследование лиц, половые партнеры которых имеют жалобы на выделения, жжение, зуд, дискомфорт и др. или установленный диагноз ИППП

Спектр возможностей ПЦР в диагностике инфекций

Высокая чувствительность и точность показаний. Если в биоматериале присутствует ДНК возбудителя даже в единичном количестве, диагностика его обнаружит.

Быстрое получение результатов.

На ПЦР можно производить любой забор биологического материала.

Специфичность 100%. Во время исследования обнаруживают специфичный фрагмент ДНК, принадлежащий определенному патогену.

Доступность метода. Для проведения диагностики не нужно специального дорогостоящего оборудования, поэтому ее делают во многих клиниках.

Достаточно взять биоматериал один раз, чтобы обнаружить инфекцию.

вероятность ложного результата (хотя такое бывает крайне редко, но все-таки риск есть)

если микроорганизмы мутируют, то обследование не выявит их ДНК (такое бывает крайне редко);

чтобы обнаружить скрытые инфекции (например, трихомониаз или хламидиоз), бывает необходима стимуляция;

процедура достаточно дорогостоящая (500-2000 руб.).

Достоинств у ПЦР диагностики ИППП значительно больше, поэтому ее очень часто используют в медицинской практике.

О результатах и ценах

Параметр Референсные значения Единицы измерения
Урогенитальные инфекции у мужчин
Количество клеток в образце (параметр используется для клинической интерпретации) >5000
ДНК Neisseria gonorrhoeae
ДНК Chlamydia trachomatis
ДНК Mycoplasma genitalium
ДНК Trichomonas vaginalis
ДНК Ureaplasma parvum
ДНК Ureaplasma urealyticum
ДНК Mycoplasma hominis
Не обнаружено ГЭ/мл
ДНК Candida albicans/ glabrata/ krusei/ parapsilosis/ tropicalis Не обнаружено ГЭ/мл

Выявление ДНК Candida свидетельствует о наличии возбудителя. Но необходимо учитывать наличие клинических проявлений заболевания и высокую частоту встречаемости дрожжеподобных грибов Candida у клинически здоровых лиц.

Обращаем Ваше внимание на то, что интерпретация результатов исследований, установление диагноза, а также назначение лечения, в соответствии с Федеральным законом ФЗ № 323 «Об основах охраны здоровья граждан в Российской Федерации», должны производиться врачом соответствующей специализации.


[“serv_cost”]=>
string(4) “2115”
[“cito_price”]=>
NULL
[“parent”]=>
string(2) “25”
[10]=>
string(1) “1”
[“limit”]=>
NULL
[“bmats”]=>
array(3) {
[0]=>
array(3) {
[“cito”]=>
string(1) “N”
[“own_bmat”]=>
string(2) “12”
[“name”]=>

string(8) “Моча”
}
[1]=>
array(3) {
[“cito”]=>
string(1) “N”
[“own_bmat”]=>
string(2) “12”
[“name”]=>
string(54) “Секрет предстательной железы”
}
[2]=>
array(3) {
[“cito”]=>
string(1) “N”
[“own_bmat”]=>

string(2) “12”
[“name”]=>
string(51) “Соскоб/отделяемое из уретры”
}
}
[“within”]=>
array(2) {
[0]=>
array(5) {
[“url”]=>
string(14) “budushhij-papa”
[“name”]=>
string(23) “Будущий папа”
[“serv_cost”]=>

string(4) “3630”
[“opisanie”]=>
string(0) “”
[“catalog_code”]=>
string(6) “300123”
}
[1]=>
array(5) {
[“url”]=>
string(38) “budushhij-papa-rasshirennaja-programma”
[“name”]=>
string(67) “Будущий папа (расширенная программа)”
[“serv_cost”]=>
string(4) “7620”
[“opisanie”]=>
string(0) “”
[“catalog_code”]=>
string(6) “300124”
}
}
}

Результаты исследования можно получить на следующий день. Количественный показатель, иначе, число полученных копий инфекционного агента, указывается редко. В большинстве случаев пациент получает бланк с качественной интерпретацией результата. Варианты могут быть:

  • «обнаружено» или «положительно» – наличие инфекционного заболевания;
  • «не обнаружено» или «отрицательно» – отсутствие заражения.

Положительный результат при отсутствии выраженных проявлений болезни свидетельствует о латентном бессимптомном течении инфекции или пребывании возбудителя в стадии инкубации. Исследование относится к средней ценовой категории.

В клиниках Москвы и других крупных городов стоимость определения одного вида инфекции варьируется от 300 до 500 руб. Комплексный анализ ПЦР-12, как правило, обходится дешевле, чем проверка на каждый возбудитель отдельно.

Такой анализ как ПЦР мочи и другого биологического материала бывает двух типов:

  • Качественным. Результаты в листке с анализом могут иметь отрицательное и положительное значение. В первом случае возбудитель не найден, а во втором обнаружен.
  • Количественным. Определяет число определенных патогенов. Значение 8х105МЕ/мл указывает на острую форму болезни, а 4х105МЕ/мл на процесс выздоровления.

Более точную расшифровку может дать только специалист.

Сдача ПЦР анализов после окончания антибиотикотерапии

После того, как пациент пролечился от заболевания, ему необходимо сдать контрольный анализ. Однако антибиотикотерапия может негативно отразиться на ПЦР. Дело в том, что частицы уже погибших патогенов еще некоторое время находятся в организме. ПЦР не сможет определить их жизнеспособность и даст ложный результат. Поэтому перед тем, как сдавать анализы, после прохождения курса лечения должно пройти минимум 4 недели.

Заключение

ПЦР диагностика является предпочтительной при подозрении на ЗППП. Она позволяет не только выявить ДНК возбудителя, но и определить его количество. Благодаря этому врач сможет подобрать наиболее эффективную методику терапии, а значит, удастся избежать опасных осложнений.

Рейтинг
( Пока оценок нет )
Понравилась статья? Поделиться с друзьями:
TehnoSklad66.ru